¿Por qué es relevante la eliminación de TFA de péptidos sintéticos?
La mayoría de péptidos sintéticos Todavía se fabrican por procedimientos en fase sólida. Debido a las etapas de escisión y purificación estandarizadas, el producto resultante generalmente contiene sales de TFA. El TFA se une a los extremos amino libres, así como a las cadenas laterales de los residuos de lisina, histidina y arginina cargados positivamente. Este emparejamiento de iones es fuerte y requiere un paso de reemplazo de iones adicional para eliminar el TFA de los péptidos purificados o crudos. Por lo tanto, en general, los péptidos disponibles comercialmente contienen niveles variables de TFA.
La presencia de AGT en el material peptídico no solo interfiere con la caracterización fisicoquímica, sino que también afecta los estudios biológicos. Varias investigaciones han documentado la influencia de TFA en la estructura del péptido. Por ejemplo, la caracterización del péptido beta-amiloide sintético ha demostrado la fuerte influencia de los contraiones de TFA en las propiedades fisicoquímicas de estos péptidos (Shen, 1994). En particular, se ha demostrado que los AGT pueden cambiar la estructura secundaria, la solubilidad y la propensión a la agregación de los péptidos beta amiloides sintéticos e incluso afectar el tamaño, la flexibilidad y la geometría definitivos de las fibrillas beta amiloides. Por lo tanto, no es sorprendente que incluso pequeñas cantidades de TFA puedan alterar los resultados de los estudios in vivo y que el TFA presente en el material peptídico dificulta la caracterización de la muestra por espectroscopia FTIR. El TFA tiene una fuerte banda de absorción infrarroja (IR) a 1673 cm-1, que se superpone significativamente o incluso oculta por completo la banda amida I de un péptido. La sal de TFA se debe eliminar del péptido para poder utilizar la espectroscopia de absorción IR para la caracterización fisicoquímica o la determinación de la concentración del péptido. Además, el TFA unido puede alterar la masa aparente de un péptido según se determina mediante pesaje. Una única molécula de TFA unida a un péptido es equivalente a agregar un aminoácido (113 Da) a la secuencia. Por este motivo, las preparaciones de péptidos informadas como "& gt; 98 por ciento puras (por HPLC)" a menudo tienen un contenido de péptidos verdadero de solo alrededor del 70 por ciento.
